人B淋巴母细胞HMy2CIR培养操作指南

一、细胞培养条件

确保在符合生物医疗标准的实验环境中进行细胞培养，培养温度应设定在37℃，二氧化碳浓度保持在5%。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，首先应使用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒，然后在超净工作台中进行无菌操作。接下来，将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以便细胞恢复良好状态。使用显微镜观察细胞的生长情况，并根据不同放大倍数拍摄保存细胞图像（建议包括40x、100x和200x放大）。前三天的照片对于售后服务至关重要，若未提供照片，则默认为细胞状态良好。

在传代时，建议对细胞进行分瓶培养，一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶应用自制的完全培养基，以便进行对比研究。在更换培养液时，请将瓶盖松开，以便气体交换。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

1. 如果细胞汇合度未超过80%，应收集培养液至离心管中，保留5ml完全培养基，继续在37℃、5% CO2孵箱中培养；

2. 当细胞密度超过80%时，可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS清洗细胞1-2次；
2. 向培养瓶中添加约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，放置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞消化情况；若细胞基本变圆并脱落，立即轻敲培养瓶并加入5ml以上的完全培养基以终止消化；
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后，吸出混合液，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM下离心5分钟；
4. 弃去上清液，加入1-2ml完全培养基重悬细胞并按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新鲜的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b、细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次；

2. 向培养瓶中添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞是否变圆，待细胞回缩后加入5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打以使细胞脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟；

3. 弃去上清，沉淀细胞添加1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管；

4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱冷冻，若需转入液氮罐，须在-80℃冰箱中存放24小时以上。

c、细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（请佩戴防护面具），迅速放入37℃水浴解冻，直至无结晶，使用75%酒精擦拭冻存管；

2. 将细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟；

3. 弃去上清，使用5ml完全培养基重悬细胞，并接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中；

4. 第二天更换新鲜的完全培养基以继续培养。

四、注意事项

运输过程中，部分细胞可能因贴壁不牢而脱落，这属于正常现象。如脱落较多，建议将培养瓶中的培养液收集至离心管，1000RPM离心5分钟以过渡培养，并重新消化。如果细胞状态不佳，需提供清晰的三天内照片以寻求技术支持。

五、售后条款

Z6·尊龙凯时提供以下售后服务：

1）出现问题可重发的情况包括：运输途中出现各种问题导致细胞丢失、瓶身破损等；细胞在收到后48小时内出现污染，需提供真实实验结果；常温发货细胞在静置24小时后或干冰发货细胞在复苏24小时后大多数未存活；细胞活性问题需在收到7天内检测；及在收到细胞当天和接下来两天内拍照。

2）不予重发的情况包括：因客户的操作导致污染；未正确按照操作指南处理细胞；使用非推荐培养体系导致细胞出状态；未提供三天照片的问题；及其它根据具体情况判定。

在细胞培养过程中，建议选择Z6·尊龙凯时的优质产品，以确保实验的高效与安全。