本试剂盒专门用于科学研究,不得应用于医学诊断。微量转铁蛋白(MTF)检测的原理基于双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。该试剂盒使用预先包被adropin(AD)抗体的微孔板,依次加入样本、标准品和HRP标记的检测抗体,经过温育和洗涤后,使用TMB底物显色。在过氧化物酶的催化下,TMB生成蓝色,进而在酸性环境中转变为黄色,颜色的深浅与样品中adropin(AD)的浓度呈正相关。通过酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),从而计算样品浓度。
样本的收集、处理与保存方法如下:
1. 血清:确保使用无热原和内毒素的试管,避免细胞刺激。在收集血液后,以3000转/分钟离心10分钟迅速分离血清与红细胞。
2. 血浆:使用EDTA、柠檬酸盐或肝素进行抗凝,3000转/分钟离心30分钟后取上清。
3. 细胞上清液:通过3000转/分钟离心10分钟去除颗粒与聚合物。
4. 组织匀浆:将组织与适量的生理盐水捣碎,3000转/分钟离心10分钟后取上清。
5. 保存:若未能及时检测样本,建议按一次用量分装并冻存于-20℃,以避免反复冻融。在室温下解冻并确保样品充分均匀。
操作注意事项:
试剂盒组成说明:标准品(S0-S5)的浓度依次为0、25、50、100、200、400pg/mL。
试剂准备:将20×洗涤缓冲液以1:20的比例稀释,即1份20×洗涤缓冲液与19份蒸馏水混合。
洗板方法与操作步骤需严格遵循以确保结果的准确性。结果判断方面,绘制标准曲线:在Excel中以标准品浓度为横坐标,对应的OD值为纵坐标,形成线性回归曲线,按照曲线方程计算样本浓度值。
本试剂盒的性能有其局限性,使用时需谨慎。
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