荧光定量PCR（Real-time PCR）是一种重要的生物技术，在PCR扩增反应中加入荧光基团，通过实时检测每个扩增循环中产物的荧光信号，从而对未知模板进行定量分析。这种方法以探针法为典型示例，在PCR扩增过程中，除了加入引物外，还会添加一个特异性的荧光探针，该探针的两端各标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。初始阶段，探针完整结合在DNA单链上，报告基团发出的荧光信号被淬灭基团吸收，因此未能检测到荧光信号。而随着PCR扩增，Taq聚合酶会降解探针，从而使报告荧光基团与淬灭基团分离，荧光监测系统便能接收到荧光信号，实现PCR产物形成与荧光信号的同步累积。

相较于传统PCR检测需要染色处理和电泳分离，只能进行定性分析且易出现假阳性，荧光定量PCR具备了更高的灵敏性、特异性和可靠性，逐渐取代常规PCR。就在扩增反应的初期阶段，荧光信号变化微小，接近于一条基线，该基线可自动生成或手动设置。随后进入指数增长期，此阶段的扩增曲线重复性极高，期间可设定荧光阈值线，通常该阈值为荧光信号指数扩增阶段3-15个循环标准偏差的10倍。每个反应管内荧光信号达到设定阈值时所经历的循环数被称为CT值，该值与初始浓度的对数存在线性关系，并具有重现性。

CT值的主要意义是计算目的基因的表达量，涉及绝对定量和相对定量两个概念。绝对定量旨在测定目的基因在样本中的拷贝数，而相对定量则比较不同样本中基因的相对含量，而无需具体知道每个样本的拷贝数。尽管CT值可用于计算这两种定量结果，但绝对定量需借助已知拷贝数的标准品并制作标准曲线，而相对定量则可选择制作或不制作标准曲线。因此，鉴于绝对标准品制作的难度，实验室通常倾向于采用相对定量方法来评估基因表达量。

自荧光定量PCR发明以来，其在生物医学领域的影响重大，应用范围广泛如下：

1. 核酸定量分析

可用于感染性疾病的定量定性检测，如甲型H1N1流感、转基因动植物基因拷贝数的检测等。

2. 基因表达差异分析

比较不同处理样本间特定基因的表达差异，确认cDNA芯片或差别表达结果。

3. SNP检测

检测单核苷酸多态性，研究个体对疾病的易感性及对特定药物的不同反应，采用这种技术进行高通量SNP检测简单而准确。

4. 甲基化检测

与许多疾病相关，特别是癌症，该检测方法高灵敏度且便捷。

5. 产前诊断

通过实时荧光定量PCR检测胎儿DNA，进行遗传性疾病的产前监测，减少病婴出生风险。

6. 病原体检测

可用于对多种病原体的定量测定，优于传统检测方法的灵敏度和速度。

7. 药物疗效考核

如乙型和丙型肝炎病毒的定量分析，帮助了解病毒量与药物疗效的关系。

8. 肿瘤基因检测

检测癌基因的表达和突变情况，助于早期肿瘤诊断及治疗。

Z6·尊龙凯时在荧光定量PCR技术的研发和应用中，致力于推动生物医学领域的进步，以更加精准的检测、分析手段助力健康科学的发展。