Z6·尊龙凯时大鼠成纤维样滑膜细胞（FLS）培养说明书

一、细胞培养条件

细胞名称：大鼠成纤维样滑膜细胞（FLS）

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：DMEM + 10% FBS + 1% 双抗

传代方法：第一次建议1:2传代

传代情况：每两天更换培养基

备注：使用无菌离心管收集培养基，进行对比培养，若效果不佳，建议直接购买我们的完全培养基

二、细胞收到后的处理

当细胞达到良好状态后，灌满完全培养液并封好瓶口，是运输细胞的最佳办法。收到细胞后，用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后将其放置于超净台内进行严格的无菌操作。接着，将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再进行处理。使用显微镜观察细胞生长情况并拍摄不同倍数的照片保存（建议拍摄40x、100x、200x各一张），前三天的照片是重要的售后依据，若未提供照片则默认收到状态良好。

建议在传代后，一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基，以便进行对比培养，并在换液后适当松开瓶盖。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

1. 若细胞聚集度未超过80%，将培养瓶中的完全培养液收集至离心管中，保留5ml培养基，在37℃、5% CO2的培养箱中培养；

2. 若细胞密度超过80%，即可进行传代，具体步骤如下：

1) 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次；

2) 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞消化情况，若大部分细胞变圆并脱落，轻敲培养瓶后加入5ml以上完全培养基终止消化；

3) 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬；

4) 将细胞悬液按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次；

2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM离心5分钟；

3. 弃去上清，沉淀细胞加入1ml的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后装入冻存管中；

4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱保存，如需转入液氮罐中，则需在-80℃冰箱中存放24小时以上后再转入液氮罐中。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（请佩戴防护面具），迅速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管内无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；

2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟；

3. 弃去上清，重悬细胞于5ml完全培养基，接种至T25培养瓶中，置于37℃、5% CO2细胞培养箱中培养；

4. 第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

运输过程中，部分细胞可能因粘附力不足而脱落，属正常现象。如脱落较多，可按以下方法处理：将培养瓶中的所有培养液收集至离心管，1000RPM离心5分钟，收集上清进行过渡培养，沉淀后加入胰酶1-2ml，轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后加5ml完全培养基终止反应，随后再次离心并重悬；再按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

五、售后条款

1）细胞在出现问题时的重发情况与判定标准：

1. 细胞运输中遭遇的问题如丢失、瓶破损、培养液漏液等，均可重发；

2. 细胞污染问题请在收到产品48小时内提供真实实验结果，核实后重发；

3. 常温发货细胞静置24小时后或干冰发货细胞复苏24小时后，若绝大多数细胞未存活（需提供真实清晰的细胞状态照片）则可重发；

4. 干冰发货的细胞复苏后24小时或常温发货细胞静置4小时未开封且出现污染，可重发；

5. 细胞活性问题需在收到产品7天内提供真实实验结果，使用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后重发；

6. 收到细胞当天以及第2、3天请拍照，若3天未告知则视为产品合格。

7. 在4-7天内出现问题的，需提供收到细胞前3天的照片及相关操作详细步骤，与技术人员沟通后，由技术人员判定责任，如判定为我方责任则可重发；若判定为双方责任则按合同价的50%收费重发。

2）细胞出现问题时不予重发的情况：

1. 客户造成的细胞污染，不予重发；

2. 客户因不正确操作导致细胞状态不佳，不予重发；

3. 使用非本库推荐的细胞培养体系导致细胞状态不佳，不予重发；

4. 细胞状态不佳且未提供细胞培养前3天照片的不予重发；

5. 在细胞培养过程中经过其他处理的不予重发；

6. 收到细胞后2天内未告知的问题，亦不予重发；

7. 其他情况将具体视情况而定。